Ekstrakt kore nara (Punica granatum L.) kao prirodni antivirusni agens za redukciju humanih norovirusa in vitro

Abstract

Humani norovirusi (HuNoV) su dominatni uzročnici epidemija akutnog gastroenteritisa izazvanihkontaminiranom hranom. U cilju njihove redukcije sa površine svežeg povrća i površina koje dolazeu kontakt sa hranom, testirana je antinorovirusna aktivnost 11 ekstrakata lekovitih biljaka. Za daljaistraživanja izabran je ekstrakt kore nara, koji je u koncentraciji 5 mg/mL redukovao broj česticaHuNoV za 99% u fosfatnom puferu, simuliranim gastrointestinalnim fluidima i na površinamasvežeg čeri paradajza i mladog luka, a za 91% u mleku. Matični sok od nara redukovao je HuNoVza 97%. Potencijal ekstrakta kore nara kao prirodnog dezinfekcionog sredstva na površinama odnerđajućeg čelika i plastike je značajan (> 3 log10 GE/μL) i u skladu sa predloženim normama kojese primenjuju za virusna dezinfekciona sredstva. Radi komparacije, testirano dezinfekciono sredstvana bazi hipohlorita (250 ppm) redukovalo je HuNoV na približno istom nivou. Proverena jedezinfekcija površina kontaminiranih mešavinom suspenzija HuNoV i koliformne bakterijeEscherichia coli, primenom brzog ATP bioluminiscentnog testa i RT-qPCR metodom. Sredstvo nabazi hipohlorita bez naknadnog ispiranja, dalo je rezultat koji se našao u zoni upozorenja, dok surezultati nakon ispiranja vodom detektovani u zoni čistog. Broj detektovanog HuNoV nanerđajućem čeliku i plastici, posle sanitacije sa sredstvom na bazi hipohlorita iznosio je 2,2 odnosno2,38 log10 GE/μL. Takođe, pokušano je da se primenom alergen indikator protein testa detektujurazličite koncentracije HuNoV (103- 106 GE/μL) nanete na prethodno sterilisanu površinunerđajućeg čelika. Posle inkubacije na 70ºC/10 min, što povećava senzitivnost testa, najvišatestirana koncentracija virusa dala je pozitivan rezultat.

Human noroviruses (HuNoV) are the dominant agents of foodborne acute gastroenteritis andepidemic outbreaks. In order to reduce them from the surface of fresh vegetables and food-contactsurfaces, the antinoroviral activity of 11 medicinal plant extracts was tested. For further research,pomegranate peel extract was selected, which at a concentration of 5 mg/mL reduced the number ofHuNoV particles by 99% in phosphate buffer, simulated gastrointestinal fluids and on the surface offresh cherry tomatoes and green onions, and by 91% in milk. Pomegranate juice reduced HuNoV by97%. The potential of pomegranate peel extract as a natural disinfectant on stainless steel andplastic surfaces is significant (> 3 log10 GE/μL) and in accordance with the proposed standardsapplicable to viral disinfectants. For comparison, the tested hypochlorite-based disinfectant (250ppm) reduced HuNoV to approximately the same level. Disinfection of surfaces contaminated witha mixture of suspension of HuNoV and coliform bacteria Escherichia coli was checked, using arapid ATP bioluminescence test and RT-qPCR method. The hypochlorite-based agent withoutsubsequent rinsing gave the result that was in the warning zone, while the results after rinsing withwater were detected in the clean zone. The number of detected noroviruses on stainless steel andplastic, after sanitation with a hypochlorite-based agent was 2,2 and 2,38 log10 GE/μL, respectively.Also, an attempt was made to detect different concentrations of HuNoV (103-106 GE/μL) applied toa previously sterilized stainless steel surface using an allergen indicator protein test. Afterincubation at 70ºC/10 min which increases the sensitivity of the test, the highest tested virusconcentration gave a positive result.